細(xì)胞培養(yǎng)——細(xì)胞復(fù)蘇

細(xì)胞培養(yǎng)是指從生物體取出組織，分離的原代細(xì)胞或細(xì)胞系，在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境（無菌，適宜溫度，PH值和一定營養(yǎng)條件）等特定的條件下培養(yǎng)，使之生存并生長。細(xì)胞培養(yǎng)是生命科學(xué)的基礎(chǔ)，目前細(xì)胞培養(yǎng)工作已廣泛應(yīng)用于生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、新藥研發(fā)等各個領(lǐng)域。

這期主題主要圍繞細(xì)胞培養(yǎng)，向大家簡單介紹細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的一些內(nèi)容，如細(xì)胞培養(yǎng)的具體流程、細(xì)胞培養(yǎng)所需的條件、細(xì)胞培養(yǎng)的注意事項及問題分析等。細(xì)胞培養(yǎng)的具體流程主要分為:細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代、細(xì)胞凍存。

本期讓我們先來了解一下

——關(guān)于細(xì)胞復(fù)蘇的相關(guān)內(nèi)容

一、什么是細(xì)胞復(fù)蘇？

細(xì)胞復(fù)蘇是將休眠的細(xì)胞重新活化,使之重新生長進(jìn)入細(xì)胞周期,進(jìn)而分裂產(chǎn)生子細(xì)胞的過程。

二、細(xì)胞復(fù)蘇的實驗操作步驟

1、從液氮罐或-80℃冰箱中取出凍存管，用冰盒將其轉(zhuǎn)移至細(xì)胞房，迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并不斷的搖動，使管中的液體迅速融化。

2、約1-2min后凍存管內(nèi)液體完全溶解，取出用酒精棉球擦拭或酒精噴灑凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)，用移液槍將細(xì)胞液轉(zhuǎn)移至含有5mL完全培養(yǎng)基的15mL離心管中，1000rpm離心5min。

3、棄去上清，用1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞團(tuán)塊，制備細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液加進(jìn)含有4mL完全培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，蓋上瓶蓋混勻。

4、將細(xì)胞培養(yǎng)瓶放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

注意事項

1.細(xì)胞復(fù)蘇的原則為快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。

2.水浴鍋一定要提前預(yù)熱到37℃。

3.一次性在水浴鍋內(nèi)融化的凍存管不要太多，會導(dǎo)致傳熱不佳，延長融化時間，對細(xì)胞造成損害。

4.實驗過程中每次將物品拿進(jìn)超凈臺中前，一定要向其噴灑75%酒精消毒，或用酒精棉球擦拭，防止污染，實驗全程無菌操作。

5.對于某些細(xì)胞比較脆弱，完全培養(yǎng)基需要提前預(yù)熱后再使用。

（發(fā)布于：2022-06-14）