細(xì)胞培養(yǎng)——細(xì)胞傳代

細(xì)胞培養(yǎng)流程主要分為：細(xì)胞復(fù)蘇、細(xì)胞傳代、細(xì)胞凍存

上一期已經(jīng)向大家介紹了細(xì)胞復(fù)蘇的相關(guān)內(nèi)容，這一期我們一起來(lái)了解一下關(guān)于細(xì)胞傳代的相關(guān)內(nèi)容。

一、什么是細(xì)胞傳代？

細(xì)胞在培養(yǎng)皿中生長(zhǎng)一定的時(shí)間后，達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，被分開(kāi)接種到新的培養(yǎng)器皿中繼續(xù)生長(zhǎng)或做實(shí)驗(yàn)。

二、細(xì)胞傳代的具體操作步驟

貼 壁 細(xì) 胞

01 從培養(yǎng)箱取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶（一般選擇處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞），轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)。棄去原有培養(yǎng)液，用1-2mL PBS緩沖液洗滌1次（注意從側(cè)壁加入，以免沖掉細(xì)胞），棄去PBS緩沖液。

02 向培養(yǎng)瓶中加入1mL胰酶，消化，將加入胰酶的細(xì)胞培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移到倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，當(dāng)細(xì)胞變圓且大量脫落時(shí)，轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)。

03 加入2mL完全培養(yǎng)基，終止消化。用移液器充分緩慢吹打，使細(xì)胞能夠完全脫落。然后將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，1000rpm/min離心5分鐘，轉(zhuǎn)移進(jìn)超凈臺(tái)，打開(kāi)蓋子，棄去上清。

04 用1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞團(tuán)塊，制備細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液分裝進(jìn)2個(gè)（或多個(gè)）含有4mL完全培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，蓋上瓶蓋混勻。

05 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

懸 浮 細(xì) 胞

01 從培養(yǎng)箱取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶（一般選擇處于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞），轉(zhuǎn)移到超凈臺(tái)。用移液器將細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞液轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，1000rpm/min離心5分鐘，轉(zhuǎn)移進(jìn)超凈臺(tái)，打開(kāi)蓋子，棄去上清。

02 用1mL完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞團(tuán)塊，制備細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液分裝進(jìn)2個(gè)（或多個(gè)）含有4mL完全培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，蓋上瓶蓋混勻。

03 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶放入37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中每次將物品拿進(jìn)超凈臺(tái)中前，一定要向其噴灑75%酒精消毒，或用酒精棉球擦拭，防止污染,實(shí)驗(yàn)全程無(wú)菌操作。

2. 適度消化：細(xì)胞消化的時(shí)間主要取決于消化液的種類、配制時(shí)間、加入培養(yǎng)瓶中的量等，消化過(guò)程中應(yīng)該注意培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)的變化，一旦胞質(zhì)回縮，連接變松散，或有成片浮起的跡象就要加入含有血清的培養(yǎng)基立即終止消化。

（發(fā)布于：2022-06-19）