細(xì)胞培養(yǎng)中的常用試劑

細(xì)胞培養(yǎng)中的常用試劑

動(dòng)物細(xì)胞或組織離開體內(nèi)到體外進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需要為其提供生長(zhǎng)所需的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及為了讓細(xì)胞在體外能夠更好的生長(zhǎng)所需要的各種試劑。本期就簡(jiǎn)單向大家介紹一下細(xì)胞在培養(yǎng)過程中所用到的一些試劑成分以及它們的作用。

01 細(xì)胞培養(yǎng)基成分

(1).基礎(chǔ)培養(yǎng)基  

常見的基礎(chǔ)培養(yǎng)基主要有MEM，DMEM，RPMI，主要提供包含葡萄糖、氨基酸、水、微量元素，碳酸氫鈉等的緩沖體系。

● 谷氨酰胺    

是細(xì)胞生長(zhǎng)所必須的必需氨基酸，參與蛋白質(zhì)合成和核酸代謝。

● 酚紅指示劑

一種常用的酸堿指示劑，在酸性時(shí)顯黃色，中性時(shí)顯紅色，堿性時(shí)為紫色，酚紅在培養(yǎng)基中作為PH值的指示劑。

● 碳酸鹽/PH緩沖系統(tǒng)

一種生理PH緩沖系統(tǒng)，由于細(xì)胞代謝過程中產(chǎn)酸，培養(yǎng)基中的HCO3-會(huì)逐漸被消耗掉，所以需及時(shí)補(bǔ)充CO2才能維持PH維持在一定范圍內(nèi)。

(2).動(dòng)物血清

在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入2%-20%血清成為完全培養(yǎng)基，血清不僅可以為細(xì)胞提供生長(zhǎng)所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還含有生長(zhǎng)因子、激素、微量元素和離子等參與細(xì)胞代謝的重要成分。

(3).抗生素

為了防止細(xì)胞在培養(yǎng)過程被污染，通常會(huì)向完全培養(yǎng)基中添加青霉素-鏈霉素混合液，即雙抗，青霉素主要對(duì)革蘭氏陽性菌有效，鏈霉素對(duì)許多革蘭氏陰性菌有效。

02 胰蛋白酶-EDTA

胰蛋白酶可使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解進(jìn)而細(xì)胞離散開，EDTA是一種化學(xué)螯合劑，毒性小，對(duì)貼壁細(xì)胞有離散作用，兩者聯(lián)合使用，分散細(xì)胞的效力更高，這一步被稱為消化細(xì)胞。對(duì)于不同細(xì)胞而言，對(duì)于胰酶使用時(shí)的溫度、時(shí)間、濃度都有不同的要求，消化不足，細(xì)胞不能被消化下來，消化過度會(huì)造成細(xì)胞損傷。因培養(yǎng)基中的血清可以降低胰酶的活性，通常使用完全培養(yǎng)基來終止細(xì)胞消化。

03 PBS緩沖液

PBS是磷酸緩沖鹽溶液，具有鹽平衡、可調(diào)整的適宜PH緩沖作用，一般用來清洗細(xì)胞，可維持細(xì)胞滲透壓。

04 二甲基亞砜(DMSO)

一種重要的滲透型細(xì)胞保護(hù)劑，是細(xì)胞凍存液中的重要成分。細(xì)胞在凍存過程中，DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，降低冰點(diǎn)、延緩凍存過程、提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，可減少細(xì)胞損傷。

05 支原體抑制劑

支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一種污染源，然而在污染初期可以使用支原體抑制劑來消除細(xì)胞液中的支原體，使實(shí)驗(yàn)可以繼續(xù)進(jìn)行下去。

06 臺(tái)盼藍(lán)染料

一種檢測(cè)細(xì)胞膜完整性常用的生物染色試劑。死細(xì)胞由于細(xì)胞膜的完整性喪失，通透性增加，細(xì)胞可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色，而活細(xì)胞因?yàn)橛型暾丶?xì)胞膜，能夠排斥臺(tái)盼藍(lán)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，因此不會(huì)被染色。在顯微鏡下通過細(xì)胞顏色可以辨別活死細(xì)胞，方便活細(xì)胞計(jì)數(shù)。

捷美JIMEI

細(xì)胞培養(yǎng)不僅需要上述的這些試劑，還需要適宜的生長(zhǎng)環(huán)境（溫度、濕度、CO2濃度），我們一直致力于細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備的研發(fā)，工藝成熟、設(shè)備參數(shù)穩(wěn)定，歡迎咨詢！

（發(fā)布于：2022-08-08）