簡(jiǎn)述哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)——HEK293細(xì)胞

隨著生物醫(yī)藥的飛速發(fā)展，哺乳動(dòng)物細(xì)胞已被廣泛用于重組蛋白、疫苗、抗癌試劑及其他臨床相關(guān)的藥物的生產(chǎn)中。      

現(xiàn)有的哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)包括中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢（CHO）細(xì)胞，嚙齒動(dòng)物細(xì)胞系（ＮSO, BHK, SP2/0）和人類細(xì)胞系（ＨEK293細(xì)胞, PER.C6, CAP, 纖維瘤），其中CHO細(xì)胞和ＨEK293細(xì)胞占據(jù)重要地位。

本期主要簡(jiǎn)述HEK293細(xì)胞的發(fā)展及蛋白表達(dá)系統(tǒng)的特點(diǎn)

1、HEK293細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)特點(diǎn)

（1）能在無(wú)血清的培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)，穩(wěn)定生長(zhǎng)，大規(guī)模表達(dá)；

（2）轉(zhuǎn)染效率高；

（3）表達(dá)蛋白結(jié)構(gòu)最接近其在人體內(nèi)構(gòu)象；

（4）在培養(yǎng)體系中能夠快速增長(zhǎng)，高密度培養(yǎng)。

2、HEK293細(xì)胞的發(fā)展

HEK293細(xì)胞來(lái)源于人類胚胎腎細(xì)胞中。在人的胚胎腎細(xì)胞中轉(zhuǎn)入人5型腺病毒DNA片段，得到的人胚腎細(xì)胞永生化細(xì)胞系即為HEK293細(xì)胞。

293T細(xì)胞

HEK293細(xì)胞中轉(zhuǎn)入SV40T-antigen基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株成為293T細(xì)胞。含SV40ori的質(zhì)粒能夠在該細(xì)胞系中顯著擴(kuò)增，從而促進(jìn)表達(dá)載體的擴(kuò)增，促進(jìn)蛋白的表達(dá)，因此被廣泛應(yīng)用于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)、基因表達(dá)和蛋白表達(dá)。在293T細(xì)胞中共轉(zhuǎn)染入pBND和pZAP質(zhì)粒，獲得的具有G418耐受的細(xì)胞系即為293T/17細(xì)胞系。該細(xì)胞系具有高轉(zhuǎn)染性的特點(diǎn)。轉(zhuǎn)入EBV基因則形成293T/17 SF細(xì)胞系，該細(xì)胞系主要用于細(xì)胞的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及蛋白表達(dá)。

293H細(xì)胞

將HEK293細(xì)胞馴化后得到的能夠在無(wú)血清培養(yǎng)體系下快速生長(zhǎng)、具有高轉(zhuǎn)染效率及高效蛋白表達(dá)性能的細(xì)胞系。該細(xì)胞系具有較好的貼附性，常用于噬菌斑檢測(cè)和蛋白的表達(dá)。例如293E細(xì)胞是在293-H細(xì)胞中插入EBNA-1基因的細(xì)胞系，該基因能夠穩(wěn)定表達(dá)EBV病毒的EBNA1蛋白。含有EBV復(fù)制起點(diǎn)（oriP）的重組表達(dá)質(zhì)粒，能夠在H293E細(xì)胞中復(fù)制，并實(shí)現(xiàn)蛋白的高效表達(dá)。而插入截短過(guò)后的EBNA-1基因得到293-6E細(xì)胞，該細(xì)胞能夠在無(wú)血清培養(yǎng)基中高表達(dá)生產(chǎn)蛋白及病毒載體。

293F細(xì)胞

能夠在無(wú)血清培養(yǎng)基中快速生長(zhǎng)并高效表達(dá)蛋白的野生型293細(xì)胞系。在293F細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pCMVSPORT6TAg.Neo 質(zhì)粒的得到293FT細(xì)胞，該細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)SV40大T抗原，并且促進(jìn)最適病毒產(chǎn)物的產(chǎn)生，可用于高滴度慢病毒載體的生產(chǎn)。當(dāng)Flp-InTMT-RETM293細(xì)胞轉(zhuǎn)染了ecotropic receptor質(zhì)粒和MAPPIT(mammalian protein-protein interaction trap)報(bào)告質(zhì)粒稱為293FTM細(xì)胞，主要用于蛋白互作的篩選。

293S細(xì)胞

被馴化成能夠懸浮培養(yǎng)且能夠耐受低鈣離子培養(yǎng)條件的293細(xì)胞系。在293S細(xì)胞轉(zhuǎn)染pcDNA6/TR質(zhì)粒得到耐受蓖麻毒素的細(xì)胞系即為293SG。該細(xì)胞系可用于四環(huán)素誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)研究以及同源的N-糖基化蛋白的表達(dá)。293SGGD細(xì)胞則是在293SG轉(zhuǎn)染pcDNA3.1-zeo-STendoT質(zhì)粒得到的細(xì)胞，其主要用于糖基化工程研究。

細(xì)胞培養(yǎng)搖床是工業(yè)中細(xì)胞培養(yǎng)所必須的，細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)不僅取決于細(xì)胞自身的狀態(tài)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的成分，外界的環(huán)境也是十分的重要，如搖床的轉(zhuǎn)速，溫度，二氧化碳濃度等。

捷美JM | 搖床系列產(chǎn)品

觸摸屏疊加搖床

針對(duì)傳統(tǒng)機(jī)芯的缺點(diǎn)，捷美自主研發(fā)了磁力驅(qū)動(dòng)機(jī)芯，具有發(fā)熱量低、運(yùn)行穩(wěn)定、噪音低、更安全、更清潔、更節(jié)能，可以在惡劣的環(huán)境下長(zhǎng)時(shí)間工作（耐高溫、高濕、弱酸堿），且減少裝置對(duì)周圍環(huán)境溫度的干擾及后期維護(hù)成本低等優(yōu)點(diǎn)。

高精度搖床系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)高精度溫度控制，溫控均勻度達(dá)±0.2℃（@37℃）；采用變頻制冷技術(shù)，控溫域更廣，達(dá)室溫以下20℃~60℃（最低4℃）；箱體采用高分子復(fù)合材料，一次成型，大大減輕用戶樓板承重。

（發(fā)布于：2022-11-09）